- 张晨星;刘芝翠;张美玉;王树军;张勇;沈浩;潘萌;王颖;
采用流式细胞术建立测定CD4+T细胞和B细胞相互黏附方法,探讨CD4+T细胞活化对B细胞黏附和活化状态的影响。分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),采用磁珠分选的方法分选CD4+T细胞和B细胞后,进一步通过体外细胞黏附技术,检测并比较未经活化和经抗CD3/CD28抗体活化的CD4+T细胞与B细胞黏附能力的差异;采用流式细胞术检测培养后的B细胞中与B细胞活化相关的Pyk2分子磷酸化水平。纯化的CD4+T细胞和B细胞经体外共同培养后,可以发生直接黏附,未活化的CD4+T细胞和B细胞共同培养后,CD4+CD19+双阳性细胞占B细胞的比例为4.024%±1.078%,经不同比例(1∶8和1∶1)抗CD3/CD28抗体活化的CD4+T细胞与B细胞作用后的CD4+CD19+双阳性细胞的比例分别为5.560%±0.863%和8.358%±1.917%(P<0.05),显著高于未活化组,表明活化的CD4+T细胞与B细胞之间的黏附能力显著提高,并随着CD4+T细胞活化程度的升高而增加;同时,活化的CD4+T细胞与B细胞发生黏附后,可以促进B细胞在短时间内发生活化,B细胞内Pyk2磷酸化的水平显著升高。本研究初步建立了用于分析CD4+T细胞和B细胞黏附水平的体外细胞学检测方法,研究结果显示活化的CD4+T细胞与B细胞发生黏附的能力显著增强,并且可直接促进B细胞的活化。
2014年03期 v.34 177-182页 [查看摘要][在线阅读][下载 304K] [下载次数：237 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 熊飞;万方方;钱乾;徐薇;
在两种品系小鼠中建立、优化和规范B组3型柯萨奇病毒(CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠模型。首先以100TCID50-10 000TCID50之间剂量的CVB3Nancy株病毒经腹腔感染易感BALB/c雄性小鼠,通过体重减轻率、死亡率和心脏病理及心肌CK-MB水平,评估建立最佳病毒性心肌炎的最佳剂量;而后摸索了在C57BL/6小鼠建立病毒性心肌炎的CVB3剂量。通过精细比较发现雄性BALB/c小鼠致心肌炎的最佳CVB3病毒滴度数量级在1000TCID50;进一步确定1500TCID50是在雄性BALB/c小鼠中诱导病毒性心肌炎的最佳剂量;C57BL/6小鼠不是易感小鼠,但在1500TCID50CVB3感染下也可诱导轻微可见的病毒性心肌炎,便于在多数基因敲除鼠内的病毒性心肌炎研究。本研究为规范病毒性心肌炎模型的建立、为后续病毒性心肌炎机制的深入研究奠定了重要的基础模型。
2014年03期 v.34 183-189页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K] [下载次数：326 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：2 ] - 许丽莉;杨佳音;
Foxp3+调节性T细胞对免疫反应的抑制作用主要依赖于其细胞表面的TGF-beta,GARP(glycoprotein A repetitions predominant)是一种富含亮氨酸重复序列的蛋白,与TGF-beta的激活密切相关。为探讨GARP与Foxp3+调节性T细胞的关系,本研究通过RT-PCR方法检测Foxp3+调节性T细胞GARP的mRNA水平、用流式细胞仪分析Foxp3+调节性T细胞表面GARP的表达。结果证实Foxp3+调节性T细胞在激活后其GARP分子mRNA的转录明显增加并在细胞表面表达,而效应T细胞(CD4+CD25-)在激活后没有表达。为了进一步分析GARP表达后对Foxp3+调节性T细胞抑制功能的影响,本研究在体外激活Foxp3+调节性T细胞后进行功能试验,结果发现激活的Foxp3+调节性T细胞在体外抑制效应细胞增生的能力大幅增加且不被TGF-beta的中和性抗体阻断。本研究结果提示GARP是Foxp3+调节性T细胞的特异性细胞表面分子并与其免疫调节功能密切相关。
2014年03期 v.34 190-194页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K] [下载次数：135 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：1 ] - 苏明宽;曾勇彬;陈静;刘灿;陈添彬;杨滨;欧启水;
综合评价HLA-DP基因多态性与中国人群慢性乙型肝炎病毒感染和肝细胞癌的相关性。系统检索PubMed、FMJS、CNKI及万方数据库有关HLA-DP基因多态性与慢性乙型肝炎病毒感染和肝细胞癌相关性的病例对照研究,按纳入标准选择文献并提取相关信息,应用Stata 12.0软件进行Meta分析。本研究共纳入HLA-DP基因多态性与HBV易感性相关文献10篇,其中与肝细胞癌相关文献3篇。Meta分析结果显示,rs3077A、rs9277535A在显性模型下不仅与HBV感染负相关(rs3077:OR=0.57,95%CI:0.53~0.63;rs9277535:OR=0.56,95%CI:0.51~0.61),还可促进HBV感染后清除(rs3077:OR=0.60,95%CI:0.52~0.68;rs9277535:OR=0.59,95%CI:0.54~0.64),其中rs3077A在显性模型下还可降低患肝细胞癌的风险(OR=0.83,95%CI:0.74~0.93)。
2014年03期 v.34 195-202页 [查看摘要][在线阅读][下载 363K] [下载次数：162 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 卢军;王树军;季萍;王颖;韩龙志;夏韵;薛峰;
为研究活体肝移植术后婴幼儿的T细胞免疫特征,探讨其在术后感染监测中的意义,我们选取41例来自上海交通大学医学院附属仁济医院活体肝移植婴幼儿受体和20例无关对照儿童,定期采集受试者外周血样本,流式细胞术比较分析CD4+和CD8+T细胞的数量、两者比例、初始和记忆性T细胞亚群的比例,以及IFN-γ的表达情况;并根据肝移植患儿组感染与否细分为感染组和稳定组,统计分析各项临床和免疫指标在感染组和稳定组中的差异。结果发现,CD4+T细胞在移植受体稳定组(65.66%±11.27%)和感染组(59.98%±16.12%)中的比例均比对照组(72.79%±8.04%)降低(P<0.0001和P=0.032),而基于CD4+T细胞的ImmunKnow ATP功能检测中也表现为感染组的数值明显低于稳定组或是对照组;其中未致敏T细胞的比例在感染组(27.23%±17.19%)中分别较稳定组(39.03±19.86%)和对照组(59.44±10.84%)显著降低(P<0.0001);而记忆性CD4+T的比例在感染组(69.03±18.78%)中分别较稳定组(56.86%±21.03%)和对照组(35.95±10.08%)显著升高(P<0.0001);CD8+未致敏T细胞的比例在感染组(33.4±23.91%)中分别较稳定组(54.35%±28.85%)和对照组(67.61%±16.28%)显著降低(P<0.0001);记忆性T细胞的比例在感染组(53.29%±26.23%)中也分别较稳定组(35.28%±28.26%)和对照组(19.42%±10.49%)显著升高(P<0.0001)。与CD8+T细胞功能密切相关的IFN-γ分泌细胞的比例在感染组CD8+T细胞中的比例明显上升。上述研究结果表明移植术后受体临床状态与T细胞的免疫功能特征改变存在一定关联,其中术后感染表现为CD4+和CD8+T细胞中未致敏细胞向免疫记忆细胞的分化,并且表现为CD8+T细胞的免疫效应功能的增强和CD4+T细胞功能的降低,提示术后感染造成患儿细胞免疫系统功能的改变。因此,通过分析CD4+和CD8+T细胞中细胞亚群的动态变化及其相关功能,同时结合相关临床指标,可作为监测婴幼儿移植术后感染的免疫学参考手段之一。
2014年03期 v.34 203-209页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K] [下载次数：73 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 李成荫;汪悦;吴素玲;孙丽霞;
将40只C57/B6小鼠随机分成正常组、模型组、血管活性肠肽(VIP)高剂量组和VIP低剂量组。正常组不予处理,余30只小鼠注射抗原制造成干燥综合征模型小鼠,首次接受抗原日起,第14天给正常组和模型组腹腔注射生理盐水0.1ml,VIP高剂量组和VIP低剂量组分别腹腔注射15nmol/ml和5nmol/ml VIP各0.1ml。定期检测各组的唾液流率。第42天后处死小鼠,取血后解剖小鼠,取小鼠颌下腺,一侧用于HE染色作病理学评价,另一侧以RT-PCR检测IL-17mRNA表达含量以及以western blot法测量颌下腺中水通道蛋白(aquaporin,AQP)5的含量。结果显示,模型组与正常组相比,42d后唾液流率明显下降,颌下腺组织学评分明显升高,颌下腺中IL-17mRNA表达明显升高,而AQP5表达量明显下降。VIP高剂量组与模型组相比,唾液流率明显增加,颌下腺组织学评分明显下降,AQP5表达量明显上升。VIP低剂量组与模型组相比,各项指标均无明显差别。研究表明,浓度为15nmol/ml VIP给予干燥综合征模型鼠腹腔注射可以保护其颌下腺的结构与功能。
2014年03期 v.34 210-215页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K] [下载次数：205 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：1 ] - 吴薇;刘元佼;陈独腾;邹晓华;刘朝奇;
利用高脂饲料和异种血清诱导建立肝纤维化模型,检测炎性因子的表达情况。将BALB/c小鼠随机分为正常小鼠组、高脂饲料饮食组、腹腔注射异种血清组、高脂饲料联合腹腔异种血清注射组。6周后,比较4组小鼠体重以及肝重指数,收集肝脏标本经HE和Masson染色后光镜观察肝组织的结构变化以及胶原纤维状况,并提取肝组织的总RNA,RTPCR检测白介素-17A(IL-17A)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)、Ⅰ型胶原蛋白(COLL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等基因mRNA水平的改变。结果显示与正常对照组体重及肝重指数(26.7±2.5g,5.24±0.81)相比显示,高脂饲料饮食组(30.4±3.7g,5.44±0.32)和高脂饲料联合腹腔异种血清注射组(30.3±1.8g,6.51±1.13)体重及肝重指数明显升高(P<0.05);HE和Masson染色显微镜下也观察到肝细胞脂肪变性,大量的胶原纤维产生;RT-PCR检测TIMP,IL-17A,COLL以及TNF-α的mRNA,相比于正常对照组,实验组肝组织mRNA表达均有升高且具有统计学意义(P<0.05)。本实验应用高脂和异种血清联合处理建立了小鼠肝纤维化模型,并发现炎性因子IL-17A及TNF-α参与了小鼠肝纤维化的形成过程。
2014年03期 v.34 216-219页 [查看摘要][在线阅读][下载 176K] [下载次数：228 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：1 ] - 宗明;张慧;虞珊珊;黄斌;傅之妍;戴兴苗;范列英;
研究葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,G6PI)对阿霉素(adriamycin,ADR)诱导类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响,探讨其作用机制。本研究从RA的关节滑膜组织中分离培养FLS,利用ADR建立细胞凋亡模型,通过流式细胞仪检测G6PI对细胞凋亡的影响,并通过western blot、Q-PCR检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase 3、Fas、Cyclin B1的表达;收集细胞培养上清,通过ELISA方法测定IL-1β和TNF-α含量。结果显示,G6PI(1μg/ml)和G6PI(10μg/ml)组RA-FLS的凋亡指数均显著低于ADR对照组;G6PI(1μg/ml)组与G6PI(10μg/ml)组间无显著差异。ADR凋亡模型中,Caspase 3、Fas和Bax表达明显上调,Cyclin B1下调;G6PI作用后,Caspase 3和Fas表达明显低于对照组,Cyclin B1表达则明显高于对照组。G6PI处理组的细胞培养上清中IL-1β和TNF-α含量均显著高于ADR对照组。研究表明G6PI可能通过Fas介导的Caspase通路来保护FLS免遭凋亡,同时促进RA-FLS分泌炎症因子IL-1β和TNF-α,从而参与RA的发生与发展。
2014年03期 v.34 220-225页 [查看摘要][在线阅读][下载 225K] [下载次数：128 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 徐金玲;赵林双;王敏;
本研究旨在探讨血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)在甲亢大鼠心肌肥大的表达及其与miRNA-350关系。将36只健康SD大鼠随机分为正常组及甲亢组,采用病理学、ELISA、RT-PCR和western blot等方法,比较甲亢组及对照组大鼠心肌肥大指标、AT1-AA、miRNA-350、AT1R mRNA及蛋白的表达;进一步将甲亢大鼠按AT1-AA检测结果分为AT1-AA阳性组和阴性组,比较两组miRNA-350、AT1R mRNA及蛋白的表达。结果显示,甲亢大鼠心肌肥大指标较正常大鼠均明显升高,且甲亢大鼠AT1-AA阳性率及A值明显高于对照组大鼠。甲亢组大鼠miRNA-350及AT1R的表达明显高于正常对照组,并深入研究发现AT1-AA阳性组miRNA-350及AT1R的表达亦高于AT1-AA阴性组。上述结论表明,AT1-AA参与甲亢大鼠心肌肥大的病理生理过程,miRNA-350在甲亢心肌肥大时AT1-AA的产生中发挥关键作用。
2014年03期 v.34 226-231页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K] [下载次数：107 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ] - 夏丽玲;赵素莲;卫琴;徐晓琴;
研究荷瘤小鼠肿瘤组织中髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)的比例变化及分布特点,探讨其在机体抗肿瘤免疫中发挥的作用。采用肝癌细胞原位移植法建立小鼠原位肝癌模型,流式细胞仪检测荷瘤小鼠不同时间肿瘤组织中MDSC的比例;免疫组织化学法检测MDSC在肿瘤组织中的分布情况,以正常小鼠作对照。MDSC的比例在荷瘤小鼠肿瘤组织中比正常小鼠肝组织中明显升高,差别具有统计学意义(P<0.05),且随着荷瘤时间的延长,MDSC的比例逐渐增加。正常小鼠肝组织中仅有极少量MDSC,而荷瘤后大量增加的MDSC主要分布于肿瘤组织与正常组织交界处。可见荷瘤小鼠肿瘤组织中MDSC的比例与肿瘤进展密切相关,提示荷瘤小鼠体内MDSC增多可能参与肿瘤的免疫逃逸,促进肿瘤细胞的生长。
2014年03期 v.34 232-236页 [查看摘要][在线阅读][下载 276K] [下载次数：252 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：1 ] - 牛荣华;毛德军;臧运华;郭瑞友;
研究阿托伐他汀(atorvastatin,AT)对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)CD40L表达的影响。体外培养的HUVEC株,第2~3代用于实验。实验分5组:对照组;TNF组:培养基中加TNF-α40ng/ml;AT1组、AT2组、AT3组:加TNF-α40ng/ml基础上分别加小剂量、中剂量、大剂量含AT血清,孵育时间6h、12h和24h。采用流式细胞术测定CD40L蛋白表达水平,免疫组化染色观察细胞CD40L蛋白表达情况。HUVEC孵育24hTNF组CD40L表达量明显高于对照组(P<0.05);AT2组和AT3组明显低于TNF组(P<0.05);HUVEC孵育12h和24hAT3组组CD40L表达量明显低于TNF-α组(P<0.05);免疫组化染色显示不同剂量含AT血清预处理后,细胞阳性颗粒降低,CD40L表达下调。中剂量及大剂量含AT血清预处理能够明显下调HUVEC孵育24hTNF-α诱导的CD40L表达,AT下调TNF诱导的HUVEC CD40L表达呈孵育时程依赖性及剂量依赖性。
2014年03期 v.34 237-241页 [查看摘要][在线阅读][下载 153K] [下载次数：84 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：1 ] - 施冬艳;李霞;车楠;周士亮;孙凌云;
观察N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)治疗系统性红斑狼疮模型小鼠MRL/lpr小鼠的疗效以及对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的修复作用。将NAC加入到8周龄MRL/lpr雌性小鼠的饮用水中,8周后处死小鼠,作为NAC治疗组;以16周龄的C57BL/6小鼠及MRL/lpr小鼠为对照组。ELISA法检测外周血抗ds-DNA抗体及抗核抗体(Antinuclear antibody,ANA)水平,BCA法检测小鼠尿蛋白浓度,HE染色观察肾脏病理。取这3组小鼠的骨髓MSC体外分离培养,免疫荧光染色观察F-actin的排列,流式细胞术观察胞内ROS水平。NAC治疗组小鼠较未治疗MRL/lpr小鼠体重显著下降(P<0.01);脾脏显著减小(P<0.01);外周血抗ds-DNA抗体水平显著下降(P<0.05),而ANA水平有下降趋势(P>0.05);肾脏病理变化有所缓解,但尿蛋白浓度无显著减少(P>0.05)。NAC治疗组小鼠骨髓MSC细胞骨架F-actin的排列较MRL/lpr组整齐有序,胞内ROS水平降低(P<0.01)。结果表明,NAC对MRL/lpr小鼠有一定的治疗作用,且对其骨髓MSC异常有一定修复功能。
2014年03期 v.34 242-246+241页 [查看摘要][在线阅读][下载 253K] [下载次数：180 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：1 ]